Приложение на реакцията на фогес-проскауер за микробиологично разграничаване на enterobacteriaceae

При диференциалното откриване на Enterobacteriaceae и някои Vibrio реакцията на Voges-Proskauer заема специално място. Тестът се основава на способността на бактериите да ферментират глюкоза, за да образуват ацетоин.

Същност на изследователския процес

В микробиологията реакцията на Фогес-Проскауер често се използва за разграничаване в семейството на Enterobacteriaceae на йерсиниите (включително причинителите на псевдотуберкулоза и ентероколит), E. coli, спорообразуващите аероби. Резултатът се визуализира чрез оцветяване на средата, когато се добавят определени реактиви.

Този тест принадлежи към серията IMViC (съкращение от Indol, Methyl Red, Voges-Proskauer i Citrate), група идентификационни тестове, включващи диференциални определяния:

• с индол, основан на разцепването на триптофан до индол, използван в присъствието на реактива на Ковач или Ерлих
• с помощта на метилот или метилово червено, което определя определено pH в резултат на метаболизма на глюкозата;
• Реакция на Фогес-Проскауер за откриване на ацетил-метилкарбинол;
• използване на цитрат с промяна на цвета в резултат на алкализирането на средата.

Същността на процеса се състои в това да се визуализира наличието на диагностицируеми бактерии чрез взаимодействието на образувания от тях ацетоин с каустична поташ в присъствието на кислород. Ацетил-метилкарбинолът се окислява до диацетил, който образува съединение с яркочервен или розов цвят. Повишаване на чувствителността на теста чрез въвеждане на алфа-нафтол преди добавянето на каустичен калий.

Тестово производство

Реакцията на Фогес-Проскауер включва предварително култивиране на микроорганизмите. Чистата култура се нанася върху диференциалната диагностична среда на Кларк, чиято разновидност е бульонът на Кларк (без добавяне на агар-агар). Използват се готови или самостоятелно приготвени среди. Съставът включва:

• 5 g пептон;
• След разклащане на епруветката епруветката се разклаща с 5 g глюкоза;
• 5 g двувалентен калиев фосфат;
• 1 л дестилат.

По време на теста се извършва инокулация на култура в течна среда с помощта на стерилна бактериологична примка. Количество 5 ml в епруветка плюс контрола. Инкубиране при 35-37 градуса за два дни. След това се извършва поетапно реакцията на Фогес-Просокер:

1. В стерилна епруветка се прехвърлят 2,5 ml от културата върху бульон; 1 литър дестилат.
2. Добавят се шест капки алфа-нафтол (5% алкохолен разтвор).
3. Добавете 0,1 ml разтвор на каустичен калий или две капки.
4. Смесването се извършва чрез леко разклащане на епруветката.
5. Резултатът се оценява след 15 минути от началото на експеримента.

Алтернативен метод за изследване е инкубацията през нощта, която се намалява до 18 часа или през нощта. В допълнение към този метод се използва и експресен тест: културата се поставя в 2 ml среда, инкубира се за около 4 часа, след което се добавят реактиви в равно количество от 2-3 капки, разбърква се и резултатът се оценява след 10 минути.

Контролът е върху един от причинителите на Klebsiella pneumoniae, щам atcc 13883.

Оценка на резултата

След подходящо време след добавянето на реагентите (от 5 до 15 минути) трябва да се появи черешовочервен цвят в случай на силно положителна реакция и червен и розов цвят в случай на слабо положителна реакция. Липсата на промяна се записва като отрицателен резултат.

Излишъкът на калиев хидроксид в разтвора може да симулира положителна реакция чрез оцветяване с мед. В този случай трябва да се запише отрицателен отговор за изследваната колония. Оцветяване с мед се появява и в случаите, когато оценката се прави един час след инжектирането на реагентите.

При оценката на резултата трябва да се вземе предвид, че продължителното култивиране на въпросните микроорганизми (повече от три дни) води до подкиселяване на средата, което може да доведе до неправилен резултат от изследването. Реакцията може да бъде леко положителна или фалшиво отрицателна.

Изисквания към реактивите за изпитване

Реагентите за провеждане на реакцията на Фогес-Просокер трябва да отговарят на изискванията, като например, като например правилното Концентрация, висока чистота и стабилност, постигнати чрез спазване на правилата за съхранение.

Предварително опакованите комплекти за тестване съдържат обикновено реактиви за 100 или повече приложения и са в пластмасови или затъмнени стъклени флакони. Контрол на качеството подходяща документация.